正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。 他们合力与恶势力展开斗争……
演员：希亚·拉博夫 梅根·福克斯 乔什·杜哈明 泰瑞斯·吉布森 瑞切尔·泰勒 安东尼·安德森 强·沃特 约翰·特托罗 迈克尔·奥尼尔 凯文·杜恩 朱丽叶·怀特 阿莫里·诺拉斯科 扎克·沃德 Michael Trisler 里兹万·曼吉 威廉姆·摩根·谢泼德 克里斯托弗·约翰·托马森 伯尼·麦克 Carlos Moreno Jr. 约翰·罗宾森 特拉维斯·范·文克 彼得·雅各布森 格伦·莫肖尔 Frederic Doss 查理·博丁 乔舒华·费恩曼 克里斯·埃里斯 斯蒂芬·福特 迈克尔·肖姆斯·维尔斯 斯科特·皮
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